国产毛片久久,亚洲图片在线观看一区,天天操夜夜包,国产资源无码

技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 核酸探針標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)過(guò)程
核酸探針標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)過(guò)程
更新時(shí)間:2015-10-14   點(diǎn)擊次數(shù):1157次

實(shí)驗(yàn)原理

    分子生物研究中,zui常用的探針即為雙鏈DNA探針,它廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因植物拷貝數(shù)的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機(jī)引物合成法。

    切口平移法(nick translation) 當(dāng)雙鏈DNA分子的一條鏈上產(chǎn)生切口時(shí),E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的3'羥基末端。同時(shí)該酶具有從5'→3'的核酸外切酶活性,能從切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同時(shí)又在切口的3'端補(bǔ)上核苷酸,從而使切口沿著DNA鏈移動(dòng),用放射性核苷酸代替原先無(wú)放射性的核苷酸,將放射性同位素?fù)饺氲胶铣尚骆溨?。zui合適的切口平移片段一般為50-500個(gè)核苷酸。切口平移反應(yīng)受幾種因素的影響: (a) 產(chǎn)物的比活性取決于[α-32P]dNTP的比活性和模板中核苷酸被置換的程度。(b) DNA酶的用量和E.coli DNA聚合酶Ⅰ的質(zhì)量會(huì)影響產(chǎn)物片段的大小。(c) DNA模板中的抑制物如瓊脂糖會(huì)抑制酶的活性, 故應(yīng)使用仔細(xì)純化后的DNA。

實(shí)驗(yàn)試劑

(1) 10×切口平移緩沖液:  0.5M/L Tris-Cl (pH7.2);  0.1M/L MgSO4; 10mM/L DTT;  100ug/ml BSA。ELISA試劑盒

(2) 未標(biāo)記的dNTP原液:除同位素標(biāo)記的脫氧三磷酸核苷酸外,其余3種分別溶解于50mM/L Tris·Cl (pH7.5)溶液中,濃度為0.3mM/L。

(3) [α-32P] dCTP或[α-32P]dATP:400 Ci/mM, 10uCi/ul。

(4)E.coli DNA聚合酶Ⅰ:(4單位/ul):溶于50ug/ml BSA, 1mM/L DTT, 50%甘油,50mM/L Tris·Cl(pH7.5)中。

(5) DNA酶:1mg/ml。

(6) EDTA :200mM/L (pH8.0)。

(7) 10M/L NH4Ac。

實(shí)驗(yàn)步驟

(1) 按下列配比混合:

未標(biāo)記的dNTP 10ul

10×切口平移緩沖液 5ul

待標(biāo)記的DNA 1ug

[α-32 P]dCTP或dATP(70uCi) 7ul

E.coli DNA聚合酶 4單位

DAN酶 I 1ul

加水至終體積 50ul

(2) 置于15℃水浴60分鐘。

(3) 加入5ul EDTA終止反應(yīng)。ELISA試劑盒

(4) 反應(yīng)液中加入醋酸銨,使終濃度為0.5M/L, 加入兩倍體積預(yù)冷無(wú)水乙醇沉淀回收DNA探針。

注意事項(xiàng)

1、3H,32P及35S標(biāo)記的dNTP都可使用于探針標(biāo)記,但通常使用[α-32 P]-dNTP。

2、DNA酶Ⅰ的活性不同,所得到的探針比活性也不同,DNA酶Ⅰ活性高,則所得探針比活性高,但長(zhǎng)度比較短。ELISA試劑盒

 

化工儀器網(wǎng)

推薦收藏該企業(yè)網(wǎng)站
欧美日韩在线一区麻豆| 日韩人妻在线| 国内外精品激情刺激在线| 久久午夜黄色| 亚洲一区二区三区免费看| 一般男女在线观看中文| 久久久二十区| 日韩和欧美一级片| 少妇被粗大的猛进69视频| 夜夜嗨av成人黄| 青青草原成人在线视频| 九九热视频最新网址| 免费午夜成人福利| 麻豆91在线国产精品| 精品国产成人亚洲州午夜福利| 调教美女在线网站| 999久久久一区二区亚洲| 日日AV不卡| 芒色一A级网站| 激情小说亚洲欧美| 台湾佬精品偷拍国产一区二区| 大香蕉国产999999| 日本成人一区二区三区不卡视频| 日韩av中文av综合无码| 午夜免费福利视频一区二区| 欧美国产视频一区二区| 9国内精品9| 操骚货丝袜少妇| 新大香蕉AV| 大屁股被干91| 欧美成人精品第一区二区三区, | 欧美一级黄色片网站区| 无码一区二区三区最新| A日本久久久久| 5252av麻豆| 久久少妇内射| 国产成人精品一区二区无码| 三级网网站299| 3D 欧美 国产 日韩 另类| 欧美专区福利免费| 亚洲AV五月激情|