兔子E選擇素ELISA試劑盒

　1.間接ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒） 本法主要用于檢測(cè)抗體。以鴨病毒性肝炎（DVH）抗體的ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）為例，間接ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）的操作程序如下。 　?。?） 材料 　　① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液； 　?、?DVH包被抗原、酶標(biāo)抗抗體、陰性及陽(yáng)性DVH參考血清；待檢鴨血清； 　?、?ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）檢測(cè)儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。 　?。?） 方法步驟 　　① 加抗原包被 → 4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干 　?、?加待檢血清 → 37℃ 2小時(shí)，洗滌三次、拋干 　?、?加酶標(biāo)抗體 → 37℃ 2小時(shí)，洗滌三次、拋干 　?、?加底物液 → 37℃ 30分鐘，加終止液 　?、?用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）檢測(cè)儀測(cè)定OD值，并計(jì)算出P/N比值。 　　（3） 結(jié)果判定 已知陽(yáng)性血清與已知陰性血清的比值（P/N）≥2.1，而且已知陽(yáng)性血清的OD值≥0.4；在上述條件成立的情況下，如果待檢血清與已知陰性血清的比值（P/N）≥2.1，而且待檢血清的OD值≥0.4，則判為陽(yáng)性，否則判為陰性。 　　2.雙抗體夾心ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒） 本法主要用于檢測(cè)大分子抗原?，F(xiàn)以檢測(cè)雞傳染性法氏囊病病毒（IBDV）的雙夾心抗體ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）為例介紹本法的操作程序。 　　① 加抗體包被 → 4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干 　?、?加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干 　?、?加酶標(biāo)抗體 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干 　?、?加底物液 → 37℃ 15分鐘，加終止液 　　⑤ 用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）檢測(cè)儀測(cè)定OD值。

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　被結(jié)合的酶標(biāo)抗原的量由酶催化底物反應(yīng)產(chǎn)生有色產(chǎn)物的量來(lái)確定，如果待檢溶液中抗原越多，被結(jié)合的標(biāo)記抗原的量就越少，有色產(chǎn)物就減少，這樣根據(jù)有色產(chǎn)物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優(yōu)點(diǎn)在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測(cè)；其主要不足在于每種抗原都要進(jìn)行酶標(biāo)記，而且因?yàn)榭乖慕Y(jié)構(gòu)不同，還需應(yīng)用不同的結(jié)合方法。此外，試驗(yàn)中應(yīng)用酶標(biāo)抗原的量較多。5.阻斷ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒） 本法主要用于檢測(cè)型特異性抗體。該方法現(xiàn)已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽狂犬?。≒R）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測(cè)方法。下面以AP2型抗體的阻斷ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）檢測(cè)法為例介紹其操作程序： 　　① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干 　?、?用200μl阻斷緩沖液進(jìn)行封閉 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 　?、?加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 　　④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干 　　⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 　?、?加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液 　?、?用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）檢測(cè)儀測(cè)定OD值。 　　本試驗(yàn)同時(shí)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陰、陽(yáng)性血清對(duì)照、兔抗AP2型陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照。 　

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